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脂类分子(lipids)薄层色谱(TLC)检测(Rhodamin B)试剂盒·九游会·产品说明书

更新时间:2024-01-26  |  点击率:325

脂类分子(lipids)薄层色谱(TLC)检测(Rhodamin B)试剂盒·九游会·产品说明书

 

主要用途

 

  脂类分子(lipids)薄层色谱(TLC)检测(Rhodamin B)试剂是一种旨在使用通过薄层硅胶基质材料上,使用特定的有机溶剂,使脂类分子移动而呈现分离状态,进而在罗丹明B的染色下,特异性地使脂类分子显示荧光,以分析样品中脂类分子状况的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞和组织、植物组织,包括叶片(leaf)、谷粒(grain)、种子(seed)等样本脂类分子的色谱分析。·九游会·产品即到即用,操作简捷,性能稳定,荧光清晰。

 

技术背景

 

脂类物质(LIPIDS)是一类脂溶性(疏水性)的自然分子,分为简单脂质包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂;复合脂质包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白;和中性脂质包括甘油、固醇类(STEROL)物质,例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用,是膜结构的组成成分和细胞信号分子。细胞浆脂滴(lipid droplet)的形成是正常细胞生理过程。脂滴由中性脂质构成,通常为甘油三酯,作为脂肪酸能量储备;或胆固醇酯cholesteryl ester),作为过多细胞胆固醇的存储。薄层色谱(thin layer chromatography;TLC是一种化合物和生物分子分离、识别、定量分析的常用方法,其分离鲜明、高度敏感、快速便捷、重复性好。通过薄层附着材料上,使用特定的有机溶剂,化合物分子移动而呈现分离状态。脂类分子通常采用吸附(adsorption)机制进行分离,为三种常用机制:吸附、间隔、逆向等之一。   

 

·九游会·产品内容

 

  清理液(Reagent A            毫升

  萃取液(Reagent B            毫升

  稳定液(Reagent C            微升

  层析液(Reagent D                毫升

  荧光液(Reagent E            毫升

  层析板              

·九游会·产品说明书               1

 

保存方式

 

保存  稳定液(Reagent C)和  荧光液(Reagent E在-20冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里;  萃取液(Reagent B)和  层析液(Reagent D)容易挥发,须密闭瓶盖;有效保证6

 

用户自备

 

2毫升离心管:用于样品操作的容器

DOUNCE匀浆器:用于裂解细胞或组织

4微型台式离心机:用于样品操作

玻璃器皿(或100毫升烧杯):用于薄层层析

加热搅拌仪或烘箱:用于层析板干燥

长紫外或荧光成像仪:用于染色后观察分析

 

实验步骤

 

一、样品准备

 

1. 准备好107细胞或200毫克组织等待测样品

2. 加入xx毫升  清理液(Reagent A

3. 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

4. 在冰槽里用匀浆棒匀化细胞或组织(约2040下)

5. 将所有匀浆物移入2毫升离心管

6. 放进4微型台式离心机离心10分钟,速度为1500g

7. 小心移出200微升上清液到另一个新的2毫升离心管

8. 加入xx毫升  萃取液(Reagent B

9. 涡旋震荡10

10. 放进4微型台式离心机离心5分钟,速度为5000g

11. 小心移出1毫升上层液相到另一个新的2毫升离心管

12. 加入xx微升  稳定液(Reagent C,混匀

13. 置于冰槽里备用(注意:可以容许挥发,浓缩样品)

 

、薄层色谱层析

 

1. 准备一个玻璃器皿:参考尺寸为 5厘米(长) X5厘米(宽)X 8厘米(高)或100毫升烧杯

2. 倒入xx毫升  层析液(Reagent D(注意:液面处于底部之上1厘米)

3. 盖紧玻璃器皿盖子备用

4. 取出一块  层析板

5. 置于加热搅拌仪的加热板上孵育3分钟

6. 室温下冷却

7. 分别加上12微升(0.2厘米直径)上述制备的样品在层析板上一端,距离底边1厘米以上(注意:可以并排加上45个样品)

8. 放进上述准备好的玻璃器皿里(注意:点样端朝下;  层析液(Reagent D液面不能触及点样的样品)

9. 盖紧玻璃器皿盖子

10. 观察层析液在层析板上向上移动现象(10分钟左右),直至上沿距离层析板顶端0.5厘米处

11. 小心取出层析板

12. 置于加热搅拌仪的加热板上孵育3分钟,或直至层析液印迹消失

13. 室温下冷却

14. xx毫升  荧光液(Reagent E倒入10cm玻璃培养皿里

15. 将层析板面朝下放进培养皿里浸泡数秒

16. 即刻置于暗室里晾干或置于加热搅拌仪的加热板上孵育30秒至1分钟(注意:肉眼可见发白的斑点)

17. 即刻放到长紫外成像仪(365nm)或荧光成像仪(激发/散发波长550/590nm)成像:

脂类分子阳性呈现黄色或紫蓝色斑点,背景为粉红色

18. 计算Rf

 

【样品移动后斑点中心位置(厘米)—样品起始斑点中心位置(厘米)】÷【层析液移动后的终端位置(厘米)—层析液起始位置(厘米)】

 

注意事项

 

1. 本·九游会·产品为10次(3050个样品)操作

2. 操作时,须戴手套

3. 所有操作通风柜里进行

4.   萃取液(Reagent B  层析液(Reagent D容易挥发,须密闭瓶盖

5. 用户可以使用甘油三酯(triglycerides)、脂肪酸(fatty acids)、甘油二酯(diglycerides)、类固醇(steroids)、甘油一酯(monoglycerides) 等作为脂类分子标准品

6. 用户需要检测糖脂或磷脂。例如甾醇糖甙sterol glycosides)、磷脂酸phosphatidic acid)、单半乳糖甘油二酯monogalactosyl glycerides)、磷脂酰乙醇胺phosphatidyl ethanolamine)、磷脂酰甘油phosphatidylglycerol)、二半乳糖二甘油酯digalactosyl glycerides)、脑硫脂sulfolipid)、卵磷脂phosphatidyl choline)、溶血磷脂酰乙醇胺lysophosphatidyl ethanolamine)、溶血磷脂酰胆碱lysophosphatidyl choline)、磷脂酰肌醇phosphatidyl inositol)等,另购  特定层析液

7. 用户可以通过荧光强度分析脂类分子含量变化

8. 用户可以构建Rf层析移动图像或曲线 

9. 如果没有合适的荧光成像仪器,可以另购  特定显色液

10. 染色完成后,即刻进行成像仪观察

11. 参考图像如下:

 

 

12. 本公司提供系列薄层色谱检测试剂·九游会·产品

 

质量标准

 

1. 本·九游会·产品经鉴定性能稳定

2. 本·九游会·产品经鉴定荧光清晰


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